X
Меню

8 800 200-75-15
+7 495 640-17-71

Поиск

FAQ

назад

Как осуществляется контроль ПЦР

  • Все тест-системы «ДНК-Технологии» имеют ВК (внутренний контроль), входящий в состав реакционной смеси для амплификации – контроль прохождения реакции амплификации

  • ВК в тест-системах «ДНК-Технологии» НЕ добавляют на этапе выделения, кроме наборов реагентов для выявления, типирования и определения количества ВИЧ/гепатит (РНК-ВК, ДНК-ВК)

  • Для выявления, типирования и количественного анализа ВИЧ/гепатит на этапе выделения добавляют РНК-ВК (ВИЧ/гепатит С) и ДНК-ВК (гепатит В).

Качество выделения и ОТ также контролируется при одновременном выделении стандартов с известной концентрацией (СТ1 и СТ2).

  • В некоторых тест-системах (генетика, HLA-DRB1) в качестве внутреннего контроля используется выделенная ДНК-человека.

  • КВМ – контроль взятия материала – рекомендуется использовать для оценки содержания клеток эпителия человека в образце и для определения количества геномной ДНК человека

  • «К-» (отрицательный контроль) – контроль контаминации – проводится с этапа выделения.

Поддерживает ли оборудование (амплификаторы серии ДТ) «ДНК-Технологии» формат HRM

Формат HRM (High Resolution Melt) – высокочувствительный анализ кривых плавления - НЕ поддерживается на оборудовании «ДНК-Технологии».

Возможна ли реализация анализа FEP на оборудовании «ДНК-Технология»

  • Анализ FEP (Fluorescence detection with End Point analysis) – анализ «по конечной точке» - МОЖЕТ быть реализован на детекторах флуоресценции серии Джин

  • Амплификаторы серии ДТ могут реализовать анализ FEP при условии специально разработанной программы анализа данных (ПО «ДНК-Технологии» НЕ позволяет реализовать анализ FEP)

Какие виды ПЦР-анализа могут быть реализованы на оборудовании «ДНК-Технология»

  • Качественный анализ – форматы детекции «форез», FLASH, «в реальном времени»

  • Количественный анализ - формат детекции «в реальном времени»

- для определения вирусной нагрузки (гепатит С, В, ВИЧ) – количественный анализ со стандартами (СТ1 – 1х106, СТ2 – 3х103);

- для исследования биоценозов (Фемофлор и Андрофлор) и вирусной нагрузки ВПЧ (Кванты) – нормировка на ОБМ - общую бактериальную массу (для биоценозов) / КВМ - количество эпит.клеток (для ВПЧ)

  • Генотипирование человека/микроорганизмов - формат детекции «в реальном времени», плавление

  • Мультиплексный анализ - формат детекции «в реальном времени», для 4 каналов (наборы «ДНК-Технология») и 5 каналов (наборы других производителей при условии их адаптации под приборы серии ДТ с 5-ю каналами)

Интерпретация полученных данных происходит автоматически при использовании ПО «ДНК-Технология».

Какие дезинфицирующие средства и как часто используются в ПЦР-лаборатории

  • Обработку помещений проводят в соответствии с требованиями СП 1.3.1285-03 и СП 1.3.2322-08.

  • Рекомендуемые дезсредства представлены в Методических указаниях 2009 г. (МУ 1.3.2569-09) (см. сайт www.dna-technology.ru раздел «Информация. Нормативная документация») и включают:

- Мистраль (амины).

- 0,2%-ный раствором ДП-2Т для ежедневной влажной уборки помещения в конце рабочего дня, ежемесячной генеральной уборки и для деконтаминации (Жавель).

Не рекомендуется использовать хлорсодержащие средства

во время работы по выделению нуклеиновых кислот и амплификации, так как это может привести к ингибированию ПЦР

  • Рабочие помещения должны подвергаться ежедневному обеззараживанию ультрафиолетовым излучением в конце рабочего дня. Необходимо использовать УФ-лампы открытого типа.

Какие перчатки должны быть использованы для работы в ПЦР-лаборатории

  • Перчатки медицинские неопудренные
  • Внимание! Использование опудренных тальком перчаток приводит к ингибированию ПЦР

Какие дозаторы необходимы для работы в ПЦР-лаборатории

Дозаторы лабораторные механические или электронные одноканальные переменного объема:

  • Для выделения ДНК/РНК – с фильтром, объемом 2-20мкл, 20-200 мкл, 100-1000 мкл

  • Для приготовления реакционной смеси (ОТ и ПЦР) – без фильтра, объемом 2-20 мкл, 20-200 мкл, 100-1000 мкл

  • Для амплификации – с фильтром, объемом 0,5-10 мкл, 20-200 мкл.

  • Дозаторы, используемые в лицензированной ПЦР-лаборатории, должны быть включены в Государственный реестр средств измерений (http://fundmetrology.ru/10_tipy_si/list.aspx)

  • Полный перечень расходных материалов, рекомендуемый для функционирования ПЦР-лаборатории, представлен в Методических указаниях 2009 г (МУ 1.3.2569-09) (см. сайт www.dna-technology.ru, раздел «Информация. Нормативная документация»)

Какие наконечники необходимы для работы в ПЦР-лаборатории

Одноразовые наконечники, сертифицированные на отсутствие ДНКаз, РНКаз (маркировка: DNAse, RNAse free)

  • С фильтром (для работы с биологическим материалом и ДНК/РНК)

  • Без фильтра (для приготовления чистых реакционных смесей)

  • Для выделения ДНК/РНК – с фильтром, объемом 20-200 мкл, 100-1000 мкл

  • Для приготовления реакционной смеси (ОТ и ПЦР) – без фильтра, объемом 2-20 мкл, 20-200 мкл, 100-1000 мкл

  • Для амплификации – с фильтром, объемом 0,5-10 мкл

  • Перед приобретением наконечников необходимо уточнить их совместимость с дозаторами, используемыми в Вашей лаборатории

Какие пробирки необходимы для амплификации и детекции

1. Для ПЦР с детекцией результатов методом электрофореза и FLASH:

  • Среднестенный, прозрачный пластик для ПЦР, сертифицированный на отсутствие ДНКаз, РНКаз и ДНК (маркировка: DNAse, RNAse, DNA free)
  • При использовании Терцика для амплификации и Джина/Джина4 для детекции - микропробирки объемом 0,5 мл с плоской крышкой, стерильные.
  1. Для ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени:
  • Тонкостенный, прозрачный пластик для ПЦР, сертифицированный на отсутствие ДНКаз, РНКаз и ДНК (маркировка: DNAse, RNAse, DNA free)
  • Микропробирки (одиночные или стрипованные) или планшеты для ПЦР, объемом 0,2 мл
  • Крышки выпуклые/плоские (приборы серии ДТ имеют настройку по высоте пробирок)
  • Оптически прозрачные крышки.
  • Перед приобретением пробирок или раскапанных в пробирки тест-систем необходимо уточнить их совместимость с детекторами флуоресценции и амплификаторами, используемыми в Вашей лаборатории

Какие пробирки необходимы для выделения ДНК/РНК

Пробирки микроцентрифужные (типа «Эппендорф») объемом 1,5 мл с плоскими крышками (желательно с замком)

Какие пробирки необходимы для взятия материала

  1. Соскобы/слюна/мокрота/моча/кал и т.д.

  • Пластик, используемый для сбора биологического материала

  • Пробирки с транспортной средой/физраствором

  • Пробирки из комплекта реагентов для выделения ДНК «ПРОБА-РАПИД» (соскобы, или материал, прошедший первичную подготовку)

  1. Кровь

  • Вакуумные пластиковые пробирки типа Vacuette. Объемом 2,0 мл, 4,0 мл с ЭДТА в концентрации 2,0 мг/л (сиреневые крышки) или цитратом натрия (голубые крышки).

  • Не допускается использование гепарина в качестве антикоагулянта

Требуют ли приборы «ДНК-Технология» проведения регулярной калибровки настроек и приобретения специальных калибраторов

  • НЕ требуется приобретения и использования специальных калибраторов

  • Терцик

- Для проверки корректности поддержания заданных температур используется выносной датчик температуры реакционной смеси. Он не входит в комплект поставки (по умолчанию), но может быть туда включен (по запросу)

(см. сайт www.dna-technology.ru, раздел «Инструкции. Оборудование»)

Джин/Джин4

- Для проверки работоспособности приборов при плановой работе и при каждом изменении конфигурации комплекса (!) рекомендуется запускать программу «Настройки. Тест прибора»

(см. сайт www.dna-technology.ru, раздел «Инструкции. Оборудование»)

- В процессе детекции результатов амплификации используются заранее приготовленные фоновые пробирки, относительно которых нормируется величина сигналов «Специфика» и «Внутренний контроль». Правила приготовления фоновых пробирок описаны в инструкции к наборам реагентов с детекцией результатов в формате FLASH

(см. сайт www.dna-technology.ru, раздел «Инструкции. Реагенты»)

Приборы серии ДТ

- Необходимо проведение проверки геометрических настроек оптического блока после транспортировки или перемещения прибора. Для этого при включении прибора выбирают Настройки - Просмотр изображения. При смещении маски относительно лунок прибора необходимо изменить координаты угловых точек

(см. сайт www.dna-technology.ru, раздел «Инструкции. Оборудование»)

- Калибровку экспозиции оптических измерений не проводят, так как исходно заданы заводские параметры, оптимальные для работы с наборами реагентов «ДНК-Технология»

-Для проведения количественного анализа используются настройки теста в программном обеспечении и Стандарты, правила приготовления которых описаны в инструкциях к соответствующим наборам с детекцией результатов в формате «реального времени».

(см. сайт www.dna-technology.ru, раздел «Инструкции. Реагенты»)

Страницы