Можно ли хранить продукты амплификации
- Продукты амплификации хранятся при температуре:
+2- 8 ̊ С не более 1 месяца
-20 ̊ С не более 1 года
+2- 8 ̊ С не более 1 месяца
-20 ̊ С не более 1 года
Препараты РНК НЕ подлежат хранению
Препараты ДНК/кДНК хранятся при температуре:
+2- 8 ̊ С не более 7 суток
-20 ̊ С не более 6 месяцев
-70 ̊ С не более 1 года
Кровь
Время от взятия материала до получения плазмы – не более 6 часов
Транспортировка и хранение крови до получения плазмы +2- 8 ̊ С
Замораживать цельную кровь допустимо только в случае необходимости длительного хранения и для дальнейшего использования для определения генетических полиморфизмов. Повторное замораживание НЕ допускается.
Плазма
Допустимо хранить:
- при +2- 8 ̊ С не более 1 суток;
- при - 20 ̊ С не более 3 месяцев.
Допускается однократное размораживание.
Повторное замораживание НЕ допускается
Соскобы урогенитального тракта
Транспортировка и хранение соскоба при +2- 8 ̊ С не более 24 часов
Ликвор, мокрота, слюна, околоплодные воды, сперма, секрет предстательной железы
Транспортировка и хранение материала при +2- 8 ̊ С не более 24 часов
Смывы из рото- и носоглотки
Транспортировка и хранение соскоба при +2- 8 ̊ С не более 24 часов
Мазок из ротоглотки и полости носа, миндалин, фибриновых пленок
Транспортировка и хранение соскоба при +2- 8 ̊ С не более 24 часов
Моча
Транспортировка и хранение при +2- 8 ̊ С не более 24 часов
После хранения рекомендуется выдержать мочу при комнатной температуре (18-25 ̊С) в течение 1 часа, затем перемешать пипетированием
Лимфоциты/мононуклеары
при +2- 8 ̊ С не более 1 суток
при - 20 ̊ С не более 1 месяца.
Кровь
Берется в пробирки (вакутейнеры) с сиреневой или голубой крышками, содержащими в качестве антикоагулянта ЭДТА (сиреневые крышки) или цитрат натрия (голубая крышка).
НЕ допускается использование гепарина в качестве антикоагулянта
Плазма
Получается при цетрифугировании крови при 3000 об/мин. в течение 20 мин. при комнатной температуре.
Соскобы урогенитального тракта
Берутся универсальными зондами или цитощеткой (не допускается у беременных) в пластиковые пробирки объемом 1,5 мл с:
- реактивом «ПРОБА-РАПИД»;
- физраствором (0,5 мл).
Рекомендуется предварительно удалить слизь и свободное отделяемое.
НЕ рекомендуется накануне обследования женщинам проводить туалет половых губ и спринцевание.
Брать материал ДО проведения мануального исследования
Зеркало для получения материала из влагалища НЕ обрабатывать антисептиками.
При взятии материала из уретры воздержаться от мочеиспускания в течение -1,5-2 часов.
Ликвор, мокрота, слюна, околоплодные воды, сперма, секрет предстательной железы
Берутся в объеме 0,5- 1 мл в стерильные контейнеры.
Смывы из рото- и носоглотки
Берутся с использованием стерильного физраствора (3-5 мл - для носоглотки, 8-10 мл – для ротоглотки).
В последнем случае рекомендуется предварительное полоскание в теч.10-15 сек.
Промывную жидкость собирают через воронку в стерильные контейнеры/пробирки.
Мазок из ротоглотки и полости носа, миндалин, фибриновых пленок
Берется сухим стерильным одноразовым зондом в пластиковые пробирки пробирки объемом 1,5 мл с:
- реактивом «ПРОБА-РАПИД»;
- физраствором (0,5 мл).
Моча
Берется первая порция утренней мочи в объеме 50 мл в стерильные контейнеры.
Лимфоциты/мононуклеары
Берутся из 0,5 мл периферической крови с помощью комплекта реагентов для выделения лимфоцитов (Фиколл-урографин) производства ООО «НПО ДНК-Технология», согласно прилагающийся инструкции.
МОЖНО, если количество и качество материала для исследования соответствует рекомендованному в инструкции по работе тест-систем(ы) и возможной локализации инфекционного процесса
НЕ входит, кроме «ПРОБЫ-НК» (в состав комплекта входят РНК-ВК (ВИЧ/гепатит С) и ДНК-ВК (гепатит В) для качественного и количественного определения ВИЧ и вирусов гепатита В и С в образцах плазмы крови).
НЕ рекомендовано, особенно при работе с количественными тест-системами (Фемофлор, Квант) и наборами реагентов для выявления, типирования и определения количества ВИЧ и гепатиты.
Комплект реагентов для выделения ДНК «ПРОБА-РАПИД» - для работы с соскобами, мочой, слюной и т.д., содержащими незначительное количество примесей и ингибиторов.
В случае материала, содержащего значительное количество потенциальных ингибиторов (гной, кровь, соскобы урогенитального тракта у мужчин, а также при работе с сывороткой и плазмой крови, биоптатами, ликвором, калом и т.д., рекомендуется использование сорбентного метода (комплекты реагентов для выделения ДНК «ПРОБА-ГС», «ПРОБА-ГС-ПЛЮС») или выделения на основе преципитации (комплекты реагентов для выделения ДНК/РНК «ПРОБА-НК» и «ПРОБА-НК-ПЛЮС»).
При работе с РНК-содержащими вирусами – только «ПРОБА-НК».
Для генетических исследований с использованием цельной периферической крови - «ПРОБА-РАПИД-ГЕНЕТИКА», «ПРОБА-ГС-ГЕНЕТИКА».
Проба-НК-Фет комплект реагентов для выделения фетальной ДНК из крови матери (только Пренатальная диагностика)
Обратите внимание, что:
- «ПРОБА-РАПИД-ГЕНЕТИКА» и «ПРОБА-ГС-ГЕНЕТИКА» отличаются по составу от сходных по названию «ПРОБЫ-РАПИД» и «ПРОБЫ-ГС/ГС-ПЛЮС», поэтому не являются взаимозаменяемыми.
- «ПРОБА-ГС-ПЛЮС» и «ПРОБА-НК-ПЛЮС» одинаковы по составу с «ПРОБОЙ-ГС» и «ПРОБОЙ-НК».
Маркировка «ПЛЮС» указывает на наличие большего объема буфера для растворения и возможности получить больший объем препарата ДНК, поэтому данные реагенты рекомендуются для работы с тест-системами Фемофлор, Квант.
(см. инструкцию на сайте www.dna-technology, раздел Инструкции. Реагенты)
Экспресс-метод выделения ДНК:
- Комплект реагентов для выделения ДНК «ПРОБА-РАПИД»
- Комплект реагентов для выделения ДНК «ПРОБА-РАПИД-ГЕНЕТИКА»
Сорбентный метод выделения ДНК:
- Комплект реагентов для выделения ДНК «ПРОБА-ГС»
- Комплект реагентов для выделения ДНК «ПРОБА-ГС-ПЛЮС»
- Комплект реагентов для выделения ДНК «ПРОБА-ГС-ГЕНЕТИКА»
Метод выделения ДНК/РНК на основе преципитации:
- Комплект реагентов для выделения ДНК/РНК «ПРОБА-НК»
- Комплект реагентов для выделения ДНК/РНК «ПРОБА-НК-ПЛЮС»
Возможна при условии совпадения программы амплификации.
Более подробную информацию Вы можете узнать в СКП
8 800 200 75 15, hotline@dna-technology.ru
НД - недостоверный результат (отсутствие значений Ср по каналам флуоресценции, задействованным в анализе)
Возможные причины:
- присутствие ингибиторов;
- неверное выполнение протокола анализа;
- несоблюдение температурного режима амплификации и т.д.
Для анализа полиморфизмов –
- показатель Ср для внутреннего контроля (ВК) >32
Что делать:
- повторное проведение амплификации с имеющимся (ранее выделенным) препаратом ДНК;
- повторное выделение ДНК (перевыделение) из образца;
- повторное взятие клинического материала.
Если проблема не устранена или часто повторяется – обратиться в службу клиентской поддержки (8 800 200 75 15, hotline@dna-technology.ru)
«К+» (положительный контроль) и «К-» (отрицательный контроль) – в каждую постановку для всех тест-систем (исключение - некоторые наборы для определения генетических полиморфизмов).
Рекомендованная частота постановок К+ - в каждую постановку, согласно инструкции.
«К-» - в каждую постановку для исключения контаминации
Стандарты (СТ1 и СТ2) в количественном анализе ВИЧ/гепатит – в трех повторах каждый (!)
Минимальная частота постановки СТ1 и СТ2 - 1 раз для каждой новой серии наборов, взятых в работу (ПО позволяет загружать в текущий протокол исследований стандарты из предыдущих постановок в пределах одной серии реагентов)
КВМ – рекомендуется использовать периодически для исключения ошибок преаналитического этапа, особенно при отработке новой системы выделения.
Все тест-системы «ДНК-Технологии» имеют ВК (внутренний контроль), входящий в состав реакционной смеси для амплификации – контроль прохождения реакции амплификации
ВК в тест-системах «ДНК-Технологии» НЕ добавляют на этапе выделения, кроме наборов реагентов для выявления, типирования и определения количества ВИЧ/гепатит (РНК-ВК, ДНК-ВК)
Для выявления, типирования и количественного анализа ВИЧ/гепатит на этапе выделения добавляют РНК-ВК (ВИЧ/гепатит С) и ДНК-ВК (гепатит В).
Качество выделения и ОТ также контролируется при одновременном выделении стандартов с известной концентрацией (СТ1 и СТ2).
В некоторых тест-системах (генетика, HLA-DRB1) в качестве внутреннего контроля используется выделенная ДНК-человека.
КВМ – контроль взятия материала – рекомендуется использовать для оценки содержания клеток эпителия человека в образце и для определения количества геномной ДНК человека
«К-» (отрицательный контроль) – контроль контаминации – проводится с этапа выделения.
Формат HRM (High Resolution Melt) – высокочувствительный анализ кривых плавления - НЕ поддерживается на оборудовании «ДНК-Технологии».
Анализ FEP (Fluorescence detection with End Point analysis) – анализ «по конечной точке» - МОЖЕТ быть реализован на детекторах флуоресценции серии Джин
Амплификаторы серии ДТ могут реализовать анализ FEP при условии специально разработанной программы анализа данных (ПО «ДНК-Технологии» НЕ позволяет реализовать анализ FEP)