X
Меню

8 800 200-75-15
+7 495 640-17-71
mail@dna-technology.ru

Поиск

FAQ

назад

Каковы правила взятия материала

Кровь

  • Берется в пробирки (вакутейнеры) с сиреневой или голубой крышками, содержащими в качестве антикоагулянта ЭДТА (сиреневые крышки) или цитрат натрия (голубая крышка).

  • НЕ допускается использование гепарина в качестве антикоагулянта

Плазма

  • Получается при цетрифугировании крови при 3000 об/мин. в течение 20 мин. при комнатной температуре.

Соскобы урогенитального тракта

  • Берутся универсальными зондами или цитощеткой (не допускается у беременных) в пластиковые пробирки объемом 1,5 мл с:

- реактивом «ПРОБА-РАПИД»;

- физраствором (0,5 мл).

  • Рекомендуется предварительно удалить слизь и свободное отделяемое.

  • НЕ рекомендуется накануне обследования женщинам проводить туалет половых губ и спринцевание.

  • Брать материал ДО проведения мануального исследования

  • Зеркало для получения материала из влагалища НЕ обрабатывать антисептиками.

  • При взятии материала из уретры воздержаться от мочеиспускания в течение -1,5-2 часов.

 Ликвор, мокрота, слюна, околоплодные воды, сперма, секрет предстательной железы

  • Берутся в объеме 0,5- 1 мл в стерильные контейнеры.

Смывы из рото- и носоглотки

  • Берутся с использованием стерильного физраствора (3-5 мл - для носоглотки, 8-10 мл – для ротоглотки).

  • В последнем случае рекомендуется предварительное полоскание в теч.10-15 сек.

  • Промывную жидкость собирают через воронку в стерильные контейнеры/пробирки.

Мазок из ротоглотки и полости носа, миндалин, фибриновых пленок

  • Берется сухим стерильным одноразовым зондом в пластиковые пробирки пробирки объемом 1,5 мл с:

- реактивом «ПРОБА-РАПИД»;

- физраствором (0,5 мл).

 Моча

  • Берется первая порция утренней мочи в объеме 50 мл в стерильные контейнеры.

 Лимфоциты/мононуклеары

  • Берутся из 0,5 мл периферической крови с помощью комплекта реагентов для выделения лимфоцитов (Фиколл-урографин) производства ООО «НПО ДНК-Технология», согласно прилагающийся инструкции.

Можно ли из одного выделенного образца (препарата ДНК) делать анализ разными тест-системами

МОЖНО, если количество и качество материала для исследования соответствует рекомендованному в инструкции по работе тест-систем(ы) и возможной локализации инфекционного процесса

Входит ли ВК (внутренний контроль) в состав наборов для выделения «ДНК-Технологии»

  • НЕ входит, кроме «ПРОБЫ-НК» (в состав комплекта входят РНК-ВК (ВИЧ/гепатит С) и ДНК-ВК (гепатит В) для качественного и количественного определения ВИЧ и вирусов гепатита В и С в образцах плазмы крови).

Можно ли при работе с тест-системами «ДНК-Технологии» использовать наборы реагентов для выделения других производителей

НЕ рекомендовано, особенно при работе с количественными тест-системами (Фемофлор, Квант) и наборами реагентов для выявления, типирования и определения количества ВИЧ и гепатиты.

Назначение наборов для выделения «ДНК-Технологии»

  • Комплект реагентов для выделения ДНК «ПРОБА-РАПИД» - для работы с соскобами, мочой, слюной и т.д., содержащими незначительное количество примесей и ингибиторов.

  • В случае материала, содержащего значительное количество потенциальных ингибиторов (гной, кровь, соскобы урогенитального тракта у мужчин, а также при работе с сывороткой и плазмой крови, биоптатами, ликвором, калом и т.д., рекомендуется использование сорбентного метода (комплекты реагентов для выделения ДНК «ПРОБА-ГС», «ПРОБА-ГС-ПЛЮС») или выделения на основе преципитации (комплекты реагентов для выделения ДНК/РНК «ПРОБА-НК» и «ПРОБА-НК-ПЛЮС»).

  • При работе с РНК-содержащими вирусами – только «ПРОБА-НК».

  • Для генетических исследований с использованием цельной периферической крови - «ПРОБА-РАПИД-ГЕНЕТИКА», «ПРОБА-ГС-ГЕНЕТИКА».

  • Проба-НК-Фет комплект реагентов для выделения фетальной ДНК из крови матери (только Пренатальная диагностика)

Обратите внимание, что:

- «ПРОБА-РАПИД-ГЕНЕТИКА» и «ПРОБА-ГС-ГЕНЕТИКА» отличаются по составу от сходных по названию «ПРОБЫ-РАПИД» и «ПРОБЫ-ГС/ГС-ПЛЮС», поэтому не являются взаимозаменяемыми.

- «ПРОБА-ГС-ПЛЮС» и «ПРОБА-НК-ПЛЮС» одинаковы по составу с «ПРОБОЙ-ГС» и «ПРОБОЙ-НК».

Маркировка «ПЛЮС» указывает на наличие большего объема буфера для растворения и возможности получить больший объем препарата ДНК, поэтому данные реагенты рекомендуются для работы с тест-системами Фемофлор, Квант.

(см. инструкцию на сайте www.dna-technology, раздел Инструкции. Реагенты)

Какие наборы для выделения предлагает «ДНК-Технология»

  • Экспресс-метод выделения ДНК:

- Комплект реагентов для выделения ДНК «ПРОБА-РАПИД»

- Комплект реагентов для выделения ДНК «ПРОБА-РАПИД-ГЕНЕТИКА»

  • Сорбентный метод выделения ДНК:

- Комплект реагентов для выделения ДНК «ПРОБА-ГС»

- Комплект реагентов для выделения ДНК «ПРОБА-ГС-ПЛЮС»

- Комплект реагентов для выделения ДНК «ПРОБА-ГС-ГЕНЕТИКА»

  • Метод выделения ДНК/РНК на основе преципитации:

- Комплект реагентов для выделения ДНК/РНК «ПРОБА-НК»

- Комплект реагентов для выделения ДНК/РНК «ПРОБА-НК-ПЛЮС»

Возможна ли одновременная постановка разных тест-систем (на разные инфекции) в амплификаторах серии ДТ

Возможна при условии совпадения программы амплификации.

Более подробную информацию Вы можете узнать в СКП

8 800 200 75 15, hotline@dna-technology.ru

Что такое «нд», что делать при его возникновении

  • НД - недостоверный результат (отсутствие значений Ср по каналам флуоресценции, задействованным в анализе)

  • Возможные причины:

- присутствие ингибиторов;

- неверное выполнение протокола анализа;

- несоблюдение температурного режима амплификации и т.д.

Для анализа полиморфизмов –

- показатель Ср для внутреннего контроля (ВК) >32

  • Что делать:

- повторное проведение амплификации с имеющимся (ранее выделенным) препаратом ДНК;

- повторное выделение ДНК (перевыделение) из образца;

- повторное взятие клинического материала.

Если проблема не устранена или часто повторяется – обратиться в службу клиентской поддержки (8 800 200 75 15, hotline@dna-technology.ru)

Как часто необходимо ставить контроли

  • «К+» (положительный контроль) и «К-» (отрицательный контроль) – в каждую постановку для всех тест-систем (исключение - некоторые наборы для определения генетических полиморфизмов).

Рекомендованная частота постановок К+ - в каждую постановку, согласно инструкции.

  • «К-» - в каждую постановку для исключения контаминации

  • Стандарты (СТ1 и СТ2) в количественном анализе ВИЧ/гепатит – в трех повторах каждый (!)

  • Минимальная частота постановки СТ1 и СТ2 - 1 раз для каждой новой серии наборов, взятых в работу (ПО позволяет загружать в текущий протокол исследований стандарты из предыдущих постановок в пределах одной серии реагентов)

  • КВМ – рекомендуется использовать периодически для исключения ошибок преаналитического этапа, особенно при отработке новой системы выделения.

Как осуществляется контроль ПЦР

  • Все тест-системы «ДНК-Технологии» имеют ВК (внутренний контроль), входящий в состав реакционной смеси для амплификации – контроль прохождения реакции амплификации

  • ВК в тест-системах «ДНК-Технологии» НЕ добавляют на этапе выделения, кроме наборов реагентов для выявления, типирования и определения количества ВИЧ/гепатит (РНК-ВК, ДНК-ВК)

  • Для выявления, типирования и количественного анализа ВИЧ/гепатит на этапе выделения добавляют РНК-ВК (ВИЧ/гепатит С) и ДНК-ВК (гепатит В).

Качество выделения и ОТ также контролируется при одновременном выделении стандартов с известной концентрацией (СТ1 и СТ2).

  • В некоторых тест-системах (генетика, HLA-DRB1) в качестве внутреннего контроля используется выделенная ДНК-человека.

  • КВМ – контроль взятия материала – рекомендуется использовать для оценки содержания клеток эпителия человека в образце и для определения количества геномной ДНК человека

  • «К-» (отрицательный контроль) – контроль контаминации – проводится с этапа выделения.

Поддерживает ли оборудование (амплификаторы серии ДТ) «ДНК-Технологии» формат HRM

Формат HRM (High Resolution Melt) – высокочувствительный анализ кривых плавления - НЕ поддерживается на оборудовании «ДНК-Технологии».

Возможна ли реализация анализа FEP на оборудовании «ДНК-Технология»

  • Анализ FEP (Fluorescence detection with End Point analysis) – анализ «по конечной точке» - МОЖЕТ быть реализован на детекторах флуоресценции серии Джин

  • Амплификаторы серии ДТ могут реализовать анализ FEP при условии специально разработанной программы анализа данных (ПО «ДНК-Технологии» НЕ позволяет реализовать анализ FEP)

Какие виды ПЦР-анализа могут быть реализованы на оборудовании «ДНК-Технология»

  • Качественный анализ – форматы детекции «форез», FLASH, «в реальном времени»

  • Количественный анализ - формат детекции «в реальном времени»

- для определения вирусной нагрузки (гепатит С, В, ВИЧ) – количественный анализ со стандартами (СТ1 – 1х106, СТ2 – 3х103);

- для исследования биоценозов (Фемофлор и Андрофлор) и вирусной нагрузки ВПЧ (Кванты) – нормировка на ОБМ - общую бактериальную массу (для биоценозов) / КВМ - количество эпит.клеток (для ВПЧ)

  • Генотипирование человека/микроорганизмов - формат детекции «в реальном времени», плавление

  • Мультиплексный анализ - формат детекции «в реальном времени», для 4 каналов (наборы «ДНК-Технология») и 5 каналов (наборы других производителей при условии их адаптации под приборы серии ДТ с 5-ю каналами)

Интерпретация полученных данных происходит автоматически при использовании ПО «ДНК-Технология».

Какие дезинфицирующие средства и как часто используются в ПЦР-лаборатории

  • Обработку помещений проводят в соответствии с требованиями СП 1.3.1285-03 и СП 1.3.2322-08.

  • Рекомендуемые дезсредства представлены в Методических указаниях 2009 г. (МУ 1.3.2569-09) (см. сайт www.dna-technology.ru раздел «Информация. Нормативная документация») и включают:

- Мистраль (амины).

- 0,2%-ный раствором ДП-2Т для ежедневной влажной уборки помещения в конце рабочего дня, ежемесячной генеральной уборки и для деконтаминации (Жавель).

Не рекомендуется использовать хлорсодержащие средства

во время работы по выделению нуклеиновых кислот и амплификации, так как это может привести к ингибированию ПЦР

  • Рабочие помещения должны подвергаться ежедневному обеззараживанию ультрафиолетовым излучением в конце рабочего дня. Необходимо использовать УФ-лампы открытого типа.

Какие перчатки должны быть использованы для работы в ПЦР-лаборатории

  • Перчатки медицинские неопудренные
  • Внимание! Использование опудренных тальком перчаток приводит к ингибированию ПЦР

Страницы